اليوم: السبت 8 مايو 2021 , الساعة: 9:54 ص


اعلانات
محرك البحث


كوزميد سمات الكوزميدات واستخداماتها

آخر تحديث منذ 3 يوم و 10 ساعة 227 مشاهدة

عزيزي زائر الموقع تم إعداد وإختيار هذا الموضوع كوزميد سمات الكوزميدات واستخداماتها فإن كان لديك ملاحظة او توجيه يمكنك مراسلتنا من خلال الخيارات الموجودة بالموضوع.. وكذلك يمكنك زيارة القسم وتصفح المواضيع المتنوعه... آخر تحديث للمعلومات بتاريخ اليوم 04/05/2021

سمات الكوزميدات واستخداماتها


في الغالب تكون الكوزميدات بلازميدات ذات بكتيريا oriV، وهي عبارة عن مؤشر لانتقاء المضاد الحيوي وموقع استنساخ، إلا أنها تحمل موقعي cos أو أكثر من لامبداالعاثيات. وهنا نلاحظ أن الكوزميدات المكوكية أو الثديية (المرتبطة بمؤشرات انتقاء الثدييات و SV40 oriV) تصبح متاحة اعتماداً على الهدف المحدد لكوزميدات مدى المضيف واسعة النطاق التجريبية. وتتنوع السعة التحميلية للكوزميدات اعتماداً على حجم الناقل نفسه إلا أنها غالباً ما تتراوح بين 40 و 45 كيلوبايت . وتتضمن اجراءات الاستنساخ إنتاج زراعين ناقلين والذين يرتبطان فيما بعد بالدنا الأجنبي. وغالباً ما يتم إجراء عملية اختيار مقابل دنا الكوزميد واسع المجال (wild cosmid DNA) عبر أقصاء الحجم. إلا أنه على الرغم من ذلك، غالباً ما تُشَكِّل الكوزميدات مستعمرات وليس لويحات (plaques). كما أن كثافة الاستنساخ تكون أقل بكثير بما يتراوح بين 105 و 106 وحدة تشكل المستعمرة (colony-forming unit) لكل µg من الدنا المرتبط.


و بعد بناء مكتبات الكوزميد أو اللمبدا المؤتلفة (recombinant lambda)، يتم انتقال الحمض النووي (دنا) كله إلى داخل مضيف بكتريا إشريكية قولونية الإشريكية القولونية الملائم عبر أسلوب يُطلق عليه التعبئة داخل المعمل. فمستخلصات عملية التعبئة الضرورية يتم اشتقاقها من ليسوجينات الإشريكية القولونية E.coli cI857 (سام- جام- الحمراء (red- gam- Sam) ودام Dam (تجمع الرأس) وإيم Eam (تجمع الذيل) على التوالي). فهذه المستخلصات ستحدد وتعبيء الجزيئات المؤتلفة معملياً، منتجةً إما جسيمات عثيات بالغة (ناقلات قائمة على اللامبدا) أو بلازميدات مؤتلفة موجودة داخل قشور العثيات (الكوزميدات). فهذه الفروق تنعكس في تكرارات حدوث العدوى المختلفة التي يتم ملاحظتها لصالح ناقلات الإحلال - لامبدا. وهذا يُعوض قدرتها التحميلية المنخفضة قليلاً. كما يتم تخزين مكتبة العثية ومسحها بصورةٍ أسهل من مكتبات الكوزميدات (المستعمرات).


الدنا المستهدف يجب أن يتم قطع الدنا الجينومي المقرر استنساخه إلى مدى أحجام مناسبة للقطع المقيدة. وغابلاً ما يتم تنفيذ تلك العملية من خلال التقييد الجزئي المتبوع إما بالتجزئة الحجمية أو بعملية نزع الفوسفات dephosphorylation (غالباً ما يكون فوسفات أمعاء العجل الصغير) لتجنب هروب الكروموسوم، مثل ربط الأجزاء أو القطع الغير مرتبطة جسدياً.


كان كولينز وهون هما أول من وصفا الكوزميد إنج cosmid في عام 1978 على أنه نوعاً من بلازميد البلازميد (الذي يُستخدم غالباً ناقل استنساخ كناقل وراثي في عملية الاستنساخ ) يشتمل على سلاسل الكروموسومات، والتي تمثل سلاسل الحمض النووي (دنا) من عاثية لامدا إنج lambda phage . ونلاحظ أن الكوزميدات تُستخدم لبناء مكتبة (أحياء) المكتبات الوراثية إنج Library (biology) .



هذا وللكوزميدات القدرة على حمل ما بين 37 و 52 زوج قاعدي زوجاً قاعدياً ، في حين لا تكون بلازميد البلازميدات العادية قادرة على حمل سوى 1- 12 زوجاً قاعدياً. فهي قادرة على تنسخ الحمض النووي الريبي منقوص الأكسجين التنسخ مثل البلازميدات لو كان لها أصلٌ مناسبٌ للتنسخ فعلى سبيل المثال SV40 ori في خلايا الثدييات، ColE1 ori لتنسخ الحمض النووي (دنا) مزدوج الضفيرة أو f1 ori لتنسخ الحمض النووي (دنا) أحادي الضفيرة في بدائيات النوى . كما أنها غالباً ما تحتوى مورث مورثاً (جيناً) للانتقاء مثل مقاومة المضادات الحيوية، ومن ثم يمكن تحديد الخلايا الناقلة للعدوى من خلال التصفيح أو التبسيط على وسيطٍ يحتوي على مضادٍ حيويٍ. إلا أن تلك الخلايا التي لا تستعمر الكوزميد لن تكون قادرةً على النمو.


و على عكس البلازميدات، يمكن حزم الكوزميدات في قفيصة قفيصات عاثية ، والتي تسمح بانتقال المورثات الأجنبية الغريبة إلى داخل أو بين الخلايا عبر عملية تنبيغ (وراثة) تنبيغٍ (transduction). كما تصبح البلازميدات غير مسمتقرة بعد دمج كمٍ معينٍ من دنا الدنا داخلها، وذلك بسبب أن حجمها المتزايد يكون أكثر توصيلاً تأشيب جيني للتأشيب الجيني . وللتغلب على تلك الظاهرة، يتم استخدام تنبيغ العاثيات بدلاً من ذلك. ويمكن تحقيق ذلك بواسطة النهايات المتماسكة (cohesive ends)، والمعروفة أيضاً بمواقع cos. وبهذه الطريقة، تصبح الكوزميدات شبيهة لاستخدام عاثية لامبدا كناقل، إلا أنه تم إلغاء وفقط < >كل جينات لامبدا باستثناء تسلسل < >cos.



و تقدر سلاسل < >cos بـ ~200 زوج قاعدي زوجاً قاعدياً طولاً والتي تعتبر ضرورية لعملية الحزم (packaging). هذا بالإضافة إلى أنها تشتمل على موقع < >cosN حيث يتم رصد الدنا في كل ضفيرة، بغض النظر عن كونها 12 زوجاً قاعدياً، بواسطة الترميناز (terminase). وهذا يتسبب في أن يصبح الكوزميد الدائري خطي ذو نهايتين لزجتين أو متماسكتين لاصقتين للإثني عشر زوجاً قاعدياً. حيث يجب أن يكون الحمض النووي (الدنا) خطياً ليتناسب ضمن رأس العاثية. هذا ويمسك < >cosB بالترميناز في أثناء رصد وفصل الضفائر. في حين يُمسك الترميناز بموقع < > cosQ الخاص بالكوزميد التالي (بسبب أن عملية تكرار الدائرة الدوارة غالباً ما تُسفِر عن متسلسلات خطية (concat er))، وذلك كله بعد أن يتم حزم الكوزميد السابق، لمنع التدهور أو التفسخ بواسطة صورة الديوكسي ريبونيوكلياز (deoxyribonuclease) الخلوية.

شاركنا رأيك

 
التعليقات

لم يعلق احد حتى الآن .. كن اول من يعلق بالضغط هنا

أقسام الموقع المتنوعة أوجدت لخدمة الزائر ليسهل عليه تصفح الموقع بسلاسة وأخذ المعلومات تصفح هذا الموضوع كوزميد سمات الكوزميدات واستخداماتها ويمكنك مراسلتنا في حال الملاحظات او التعديل او الإضافة او طلب حذف الموضوع ...آخر تعديل اليوم 04/05/2021



شاهد الجديد لهذه المواقع
شاهد الجديد لهذه المواقع
شاهد الجديد لهذه المواقع